【名稱】 雞新城疫血凝抑制試驗(yàn)抗原使用說明書

本抗原系用雞新城疫病毒La Sota株接種SPF雞胚培養(yǎng)，收獲尿囊液，經(jīng)離心后滅活制成。抗原的紅細(xì)胞凝集效價(jià)不低于1:256。用于檢測(cè)雞新城疫的抗體。

【用法和判定】 

1  抗原工作液制備

1.1 抗原凝集價(jià)測(cè)定

使用96孔板按表1進(jìn)行。用稀釋液將抗原倍比稀釋成不同倍數(shù)，加入1％雞紅細(xì)胞懸液，再加入等量的稀釋液。將96孔微量板在振蕩器上搖勻，在20～30℃條件下放置20～40分鐘，當(dāng)紅細(xì)胞對(duì)照孔中的紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。使紅細(xì)胞完全凝集的最高稀釋度，作為判定終點(diǎn)。

1.2  抗原工作液配制及檢驗(yàn)

1.2.1  4×HA抗原的配制：如抗原凝集價(jià)測(cè)定結(jié)果為1:256，4個(gè)血凝單位（即4×HA）＝256/4＝64（即1:64）。取31.5ml 稀釋液，加抗原0.5ml，使最終濃度為1:64。

1.2.2  4×HA抗原的驗(yàn)證

將配制的1:64倍稀釋的抗原液分別取0.5ml的量加入0.5ml 、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml和3.0ml的稀釋液中，使最終稀釋度為1:2、1:3、1:4、1:5、1:6和1:7。然后，從每一稀釋度取液體0.025ml，加入1％雞紅細(xì)胞懸液0.025ml，再加入0.025ml 稀釋液，混勻。將血凝板在室溫下放置20～40分鐘后，如配制的抗原液為4×HA，則1:4稀釋度將給出完全凝集終點(diǎn)；如4×HA高于4個(gè)單位，可能1:5或1:6為終點(diǎn)；如果較低，可能1:2或1:3為終點(diǎn)。應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果做適當(dāng)調(diào)整，使工作液確為4×HA。

2  血凝抑制試驗(yàn)（HI）

2.1  用稀釋液將被檢血清做2倍倍比稀釋，加入含4×HA的抗原液，并設(shè)陰、陽性血清對(duì)照，充分振蕩后，置20～30℃下作用30分鐘；再加入1％雞紅細(xì)胞懸液，在20～30℃下放置20～40分鐘，當(dāng)紅細(xì)胞對(duì)照孔中的紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。使紅細(xì)胞凝集完全抑制的血清最高稀釋度作為判定終點(diǎn)。

【注意事項(xiàng)】

1．試驗(yàn)應(yīng)在20～30℃條件下進(jìn)行，每次檢測(cè)時(shí)應(yīng)設(shè)陽性、陰性血清（稀釋方法同被檢血清）及紅細(xì)胞對(duì)照。

2．工作濃度的抗原應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，使用時(shí)抗原必須充分搖勻。

3．應(yīng)將使用劑量的抗原無菌吸出，剩余抗原放回冰箱保存。

4．只用于檢驗(yàn)雞血清，不能用于雞全血反應(yīng)。

【規(guī)格】 抗原 2.0ml/瓶，20×稀釋液 30ml/瓶。

【貯藏與有效期】 2～8℃保存，有效期為24個(gè)月。

【生產(chǎn)企業(yè)】  北京中海生物科技有限公司

              中海生物技術(shù)（棗莊）有限公司  

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