中海生物技術(shù)關(guān)于質(zhì)控菌種復(fù)蘇和存放常見的十五個(gè)問題，簡單做以下解答，希望對大家有所幫助：

問題①該菌種為第三代，假如在零下八十℃存放后取出活化，應(yīng)屬哪一代？

解答：存放下來的是，第三代復(fù)活后，假如用盤子或者肉湯激活，相當(dāng)于遷移了最初代，也就是第四代，假如還在瓷珠里，依然是原本的代數(shù)。假如保持在一個(gè)斜面上，這種斜面永遠(yuǎn)是第三代，假如遷移到另一個(gè)斜面上，便是第四代。傳代培養(yǎng)/菌種活化/復(fù)蘇的原理，無論以全部形式繁殖一次，都是一代代傳下來的。然而，假如只有物理位置遷移而沒有復(fù)制，那就不是通過。

問題②當(dāng)菌種傳代培養(yǎng)并存儲在瓷珠中時(shí)，我們必須選取一個(gè)菌體嗎？

解答：并不一定要挑單獨(dú)一個(gè)菌體，但一定要挑基本特征一致的菌體，也就是從同一個(gè)菌體中提純出來，保證它們的基本特征完全相同。原則是選取盡可能多，而不是少。

問題③菌種在零下七十度或是零下八十度低溫存放有具體實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范嗎？

解答：有標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。《微生物菌種常規(guī)存放技術(shù)規(guī)范》是菌種保存的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。你可以認(rèn)真了解一下。全部的存放措施都有介紹，但瓷珠是一類相對比較新的存放措施，現(xiàn)階段都還沒收錄。GB4789.28至2013推薦長期性凍藏環(huán)境溫度不超過零下七十度。

問題④如何增加菌種的存放時(shí)長？

解答：很多科學(xué)試驗(yàn)證實(shí)，該菌種在低溫/干燥/缺氧和缺乏營養(yǎng)的條件下存放效果最合適，越接近這一存放條件，該菌種的存放時(shí)長越長。比如甘油冷凍管，在零下八十?dāng)z氏度的存放時(shí)長比在零下二十?dāng)z氏度的存放時(shí)長要長。凍干菌粉可在零下二十?dāng)z氏度存放比二至八度環(huán)境時(shí)間長。

問題⑤怎樣純化菌種？

解答：純化是從可疑菌體平板中挑選單獨(dú)一個(gè)菌體，并在合適的非選擇性平板(TSA、NA)上劃線的操作過程。分離出來單獨(dú)一個(gè)菌體。

問題⑥我們是不是需要重新傳代培養(yǎng)，只存放最初代菌種？你覺得這是一個(gè)錯(cuò)誤嗎？

解答：通常狀況下，是并不會問如此的問題的。最合適的存放措施應(yīng)該是制備最初代菌種的甘油凍存管，放進(jìn)超低溫冰箱中長期存放。第二代應(yīng)變做為工作儲備應(yīng)變，存放在斜面上。遷移后的第三代工作應(yīng)變選用第二代工作儲備應(yīng)變。

問題⑦為什么要用第三代做為工作菌種？

解答：歷經(jīng)幾次傳代培養(yǎng)后，毒株的突變概率會大大增加，所以毒株的傳代培養(yǎng)需要控制在五代以內(nèi)，而最初代毒株通常相對來說不穩(wěn)定，需要傳到第三代才可以穩(wěn)定毒株。所以在實(shí)際的工作中，中海生物通常選取第三代菌種做為工作菌種。

問題⑧質(zhì)控品菌種傳五代以上是不是要銷毀？

解答：并不一定。歷經(jīng)五代以上的傳代培養(yǎng)，只有品系變異的可能。然而，假如為第六代和第七代通行...是通過形態(tài)學(xué)/生化基本特征/DNA基本特征等來驗(yàn)證的，并且性狀保持穩(wěn)定，那么這些細(xì)菌在第五代之后仍然可以正常采用。

問題⑨菌種編碼目的？

解答：以金黃色葡萄球菌CMCCB26003為例。CMCC是中國醫(yī)學(xué)文化收藏中心的簡稱。其他常見的文化收藏包括ATCC美國標(biāo)準(zhǔn)文化收藏、CICC工業(yè)微生物文化收藏中心和FSCC食品安全文化收藏中心。B指細(xì)菌，F(xiàn)指真菌；2003年是CMCC的存放編碼。

問題⑩金黃色葡萄球菌ATCC6538和ATCC25923都有啥區(qū)別？

解答：這兩種皆來自（ATCC）美國標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物保藏中心的ATCC6538和ATCC25923菌種。不同的數(shù)字表明這兩個(gè)菌種的初始分離出來源不同。然而不同的編號的生化基本特性是不是一致，需要深入分析研究。在常常的生物學(xué)檢驗(yàn)試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌ATCC6538的溶血能力強(qiáng)于ATCC25923。

問題?用瓷珠存放管存放菌種。為什么要在加入菌液并搖勻后吸干菌液？

解答：瓷珠存放的原理是瓷珠是多孔的，細(xì)菌吸附在瓷珠上。假如去除液體，可以避免液體冷凍操作過程中產(chǎn)生的冰晶在反復(fù)凍融操作過程中破壞細(xì)菌，最終得以保護(hù)細(xì)菌。假如菌液不吸干，瓷珠的存放就達(dá)到不了反復(fù)凍融的效果。

問題?你們TSA斜面儲藏于多少度？你能把它放在冷庫里嗎？

解答：細(xì)菌的TSA斜面通常存放在二至八攝氏度，即冷凍冷藏。而弧菌/銅綠假單胞菌/嗜水氣單胞菌等對低溫敏感的菌種，在二十至二十五攝氏度的室內(nèi)溫度下短時(shí)間存放，用甘油管或瓷珠長期性冷凍。

問題?液體培養(yǎng)基可以用以回收凍干菌種嗎？

解答：可以，但假如選用液體復(fù)蘇，只能夠觀察到混濁的中海培養(yǎng)基，不可以確定是不是有污染。推薦選用平板培養(yǎng)基復(fù)蘇凍干菌種，有利于促進(jìn)簡單通過肉眼觀察菌體形態(tài)來鑒別回收菌種是不是被污染，初步鑒定菌種的純度。

問題?顯色培養(yǎng)基可以用于凍干菌種的回收嗎？

解答：不建議使用顯色培養(yǎng)基復(fù)活凍干菌種。凍干菌種是凍干的。在這個(gè)操作過程中會受到一定程度的破壞，復(fù)蘇需要一個(gè)最合適的生長環(huán)境，所以不可以選取復(fù)蘇培養(yǎng)基做為帶有抑菌成份且不利于菌種復(fù)蘇的選擇性培養(yǎng)基。顯色培養(yǎng)基應(yīng)屬選擇性培養(yǎng)基。

問題?產(chǎn)氣莢膜梭菌冷凍時(shí)需要保持厭氧狀態(tài)嗎？

解答：并不需要。產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌應(yīng)屬厭氧菌，但對厭氧程度要求不太嚴(yán)格要求，可以根據(jù)通常菌種冷凍法做好冷凍。如果是嚴(yán)格要求目的上的厭氧菌，需要特殊的冷凍措施。

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