㈠培養基標準規定

培養基的規范制備是微生物檢驗中最基礎流程其一。當采用脫水培養基和別的成份時，尤其是哪些包含毒性成分如膽鹽或別的選擇劑的成份，應遵循制造廠商給予的優秀實驗室明文規定和情況說明。中.海培養基制備不合理會造成培養基產生品質問題，如含瓊脂培養基不凝固、酸堿值沒有在標準規定范圍內、滅菌后顏色變深等。

當采用中海脫水合成培養基制備培養基時，應嚴格遵守制造廠商給予的情況說明做好制備。如凈重和體型\酸堿值值\制備時間\滅菌標準規定和操作流程步驟等。實驗室采用各種基本成分制備培養基時，應準確無誤依照配料配方做好制備，并記載相關信息及資料，如：培養基的命名和類型\試劑級別\各成份的成分含量/制造廠商/批號/酸堿值值/培養基的體型/無菌措施包括實施方法/溫度和時間/配置時間/人員等，用于追溯。

㈡培養基用水

實驗用水的電導率在二十五度時不可高于二十五μS/cm，等同于電阻率≥0.4μω/c㎡，除了另有明文規定。水的微生物污染不可高于103CFU。依據GB4789.2菌落總數，應采用平板計數瓊脂培養基，在三十六度(±1)培養四十八小時(±2)做好按時微生物污染查驗。

㈢稱重融解培養基

準確無誤稱重所需求量的脫水合成培養基。必需時戴上口罩或在通風柜中實際操作，以預防吸進包含有毒物質的培養基粉末。先添加適量的水，完全混合，防止中'海培養基結塊，隨后兌水至所需求量，適度進行加熱，頻繁或持續拌和，使其快速分散化。如有需要，應完全徹底融解。含瓊脂的培養基應當在進行加熱前泡浸數分鐘。

㈣培養基酸堿值測定調控

用酸堿值計測定酸堿值，必需時在滅菌前做好調控。除了另有明文規定，滅菌后培養基降溫至二十五度時，酸堿值應在標準規定酸堿值0.2范圍之內。通常采用濃度為40 g/L（約1摩爾每升）的氫氧化鈉溶液或濃度為約36.5 g/L（約1摩爾每升）的鹽酸溶液來調控培養基的酸堿值。假如滅菌后需要調節，請采用滅菌或滅菌溶液。

㈤分開包裝培養基

將準備好的培養基分開包裝到適度的器皿中，器皿的體型應起碼比培養基大二十倍。

㈥培養基滅菌消毒

應利用濕熱或過濾滅菌對培養基做好滅菌消毒。有很多培養基無法或不用高壓滅菌，可以采用煮沸滅菌。例如某些培養基如SC肉湯中包含對光和熱敏感的成分，煮沸后應快速降溫，遮光儲存。有很多實驗試劑可以不經過滅菌就直接采用。

高壓滅菌器或中海培養基配制設施中的高溫滅菌

通常選用一百二十一度±3高壓滅菌十五分鐘，具體中 海培養基按食品微生物檢驗標準的規范做好滅菌。培養基的體積不可高于一千毫升，不然將會影響滅菌時過熱。所有的培養基實際操作應依照規范或使用方法做好。滅菌實際效果的操控是重要環節。加熱后，以適度的方式冷卻，以防止過熱。這針對大容量的敏感培養基極其關鍵，比如包含亮綠的培養基。

過濾器滅菌可以在真空或壓力下做好。使用孔徑為0.2微米的無菌設施和濾膜。對設施的所有的部份做好消毒或使用事先消毒的設施。有些過濾膜上附著有蛋白質或其他物質，如抗生素。以便實現有效的過濾，過濾膜應當事先用無菌水潤濕。

查驗經濕熱滅菌或過濾滅菌的培養基，尤其是酸堿值/顏色/滅菌實際效果和均勻度。

㈦培養基的使用

⑴瓊脂培養基溶解

將瓊脂培養基倒入沸水浴中或利用具備相同實際效果的方式方法溶解，如高壓滅菌器中的層流蒸汽。高壓瓊脂培養基應盡可能減少再加熱時長，防止溶解后過熱。溶解后應在常溫下短期置放兩分鐘，防止玻璃容器碎裂。

將溶解的培養基倒入四十七至五十度。恒溫水浴冷卻保溫，可依據培養基真實凝固溫度適度提高水浴溫度，一直到使用。培養基達到四十七度至五十度的時長與培養基的品種及體積和數量相關。溶解的培養基要盡早使用，靜放時長不可以高于四鐘頭。未使用的培養基不可再度固化用以以后使用。敏感培養基要特別重視，溶解后的保溫時長要盡可能降低。若有特別要求，請參考特定規范。倒入試樣的瓊脂培養基溫度應操控在四十五度上下。

⑵培養基除氧

需要時，將培養基倒入沸水浴或蒸氣浴中加熱十五分鐘后使用；加熱時松掉器皿的外蓋；加熱后蓋緊，快速冷卻至使用溫度如FT培養基。

⑶添加添加劑成分

當培養基冷卻至四十七~五十度時，應添加熱不穩定添加劑。無菌添加劑在添加前要置放在常溫下，以防止冷液體影響瓊脂凝結或形成薄片。將培養基與添加的成分緩慢充分混合，并盡早分開包裝到預備器皿中。

⑷平板配制和保存

將溶解的培養基倒入皿中，在皿中形成厚度至少為三毫米、直徑為九十毫米的皿，通常添加十八毫升至二十毫升瓊脂培養基。平板扣上板蓋后，放置在水平面上冷卻凝固瓊脂。要是平板需要儲存或培養

要是時長高于四十八小時或培養溫度高于四十度，則需要倒更多的培養基。凝固后的培養基應該及時采用或貯藏于避光處及5度±3冰箱密封袋中，避免中海生物培養基成份產生變化。在平板的底端或側邊做標識，主要包括名稱、制備日期和有效期。合適的培養基編碼系統也可用作標識。

將倒入的平板放入密封袋中冷藏，可以延長儲存期。為了避免冷凝水的產生，平板在放入袋中之前應該冷卻。儲存前不能干燥培養基表面。針對表面接種培養的固體培養基，應先將瓊脂表面干燥：揭開平板蓋，在25度~50度的烘箱或培養箱中倒置平板；或者放在有對流的無菌凈化站，直到培養基表面的水滴沒有了。當心不能太過干燥。應依據制造商給予的說明采用商用平板瓊脂培養基。

㈧廢棄培養基

所有的被污染和未采用的培養基都要以安全可靠的方式并依據最新法律法規對其進行正確處理。

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