標題內(nèi)容

《美國藥典》主要內(nèi)容

《中國藥典》主要內(nèi)容

簡介

背景介紹

簡介

背景知識：熱原與內(nèi)毒素

1）“細菌內(nèi)毒素”或“內(nèi)毒素”是指革蘭陰性細菌（GNB ）外細胞膜的復(fù)雜成分，是具有生物活性的脂多糖（lipopolysaccharide,  LPS），包括各種蛋白質(zhì)、磷脂和脂蛋白。

2）內(nèi)毒素可能會在GNB 死亡后在細胞壁片段中保持活性，因此供試品可能是無菌的，但仍可能檢測出內(nèi)毒素。

3）RSE：參考標準品（Endotoxin  Reference Standard, 中國國家標準品）；CSE：對照標準內(nèi)毒素（Control standard Endotoxin, 中國稱為工作標準品）；通過Westphal 熱酚法從GNB 細胞膜中提取出來；

4）需要驗證相關(guān)內(nèi)容：測定限值；最大有效稀釋倍數(shù)（MVD。）

無

預(yù)備性試驗

1）工作標準品標定：使用RSE對CSE的校準、使用凝膠法確定CSE效價、使用定量的動態(tài)法和終點法確定CSE效價、液體CSE的活性測定；

2）質(zhì)量管理：試驗人員資質(zhì)、設(shè)備和儀器的校準與檢定、實驗室環(huán)境條件

1）無（我國RSE和CSE由國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門依法設(shè)立的藥品驗機構(gòu)生產(chǎn)并組織協(xié)作標定賦值；美國RSE由FDA生產(chǎn)并組織協(xié)作標定給賦值，CSE由鱟試劑生產(chǎn)廠家生產(chǎn)并根據(jù)RSE標定CSE。）

方法適用性

限度的計算：注射用藥品、眼部用產(chǎn)品、復(fù)合無菌制劑、活性底物和賦形劑、藥械組合產(chǎn)品以及醫(yī)療器械等

只對注射用藥品的限值確定做了相關(guān)要求，但對于多種規(guī)格的注射劑以及原料藥制定內(nèi)毒素限值的制定方面給予了明確指導(dǎo)。（對應(yīng)1.細菌內(nèi)毒素限值的確定）

MVD：當產(chǎn)品在MVD 顯示陽性時，表明其不符合內(nèi)毒素限量要求，在這種情況下，可以使用超過MVD 的稀釋倍數(shù)來進行檢驗。并建議實驗室可通過稀釋至陰性（凝膠法）或到達標準曲線上的有效讀數(shù)（定量法）的方式來確定產(chǎn)品中細菌內(nèi)毒素的總含量。

在凝膠法檢驗時，如果計算出的MVD值不是整數(shù)，可以使用小于MVD的整數(shù)進行實驗。當出現(xiàn)陽性結(jié)果時，為判斷產(chǎn)品是否合格，需采用計算的MVD重新測試。（對應(yīng)5.其他（MVD 部分））

干擾的排除：比較詳細地介紹了一些常見的干擾因素產(chǎn)生的原因和排除的方法。

重點介紹了目前細菌內(nèi)毒素檢測的一些難題，如微球脂質(zhì)體等采用包合技術(shù)制備的特殊樣品，以及難溶性的注射用原料藥和輔料，應(yīng)采取特殊的前處理將微球和脂質(zhì)體以及難溶性樣品被包裹的內(nèi)毒素釋放出來，再進行檢測，并且針對不同類型的樣品給予了不同的建議（對應(yīng)3.供試品的前處理方法）

日常檢測

采樣：對取樣所有材料（勺子，移液管，瓶）的質(zhì)地要求，采用必須采取的預(yù)防措施，生產(chǎn)中循環(huán)水系統(tǒng)中如何取樣，粉狀和顆粒狀固體尤其是對于高黏度材料如何取樣和應(yīng)注意的問題等。

無

合并：允許合并檢測

無

OOS和重新試驗：系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)未按預(yù)期發(fā)揮作用的試驗被稱為無效試驗，真正的OOS結(jié)果僅在執(zhí)行了有效的測定并產(chǎn)生超出規(guī)格的結(jié)果時存在。對OOS 調(diào)查的內(nèi)容進行了描述。

無

標準曲線控制：對光度測定法中的線性要求是| r |≥0.980。并要求用三個有效數(shù)字表示，最后一個“0”很重要；在一個控制良好的實驗室中，相關(guān)系數(shù)通常大于0.980。所有標準曲線都有一個對應(yīng)的線性方程y = mx+b，其中m是標準曲線回歸線的斜率，b是y軸截距。

無操作細節(jié)，但是要求方面與《美國藥典》一致。

替代方法

法定方法：凝膠限度法、凝膠半定量法、動態(tài)顯色法、終點顯色法、動態(tài)濁度法、終點濁度法；

替代方法的要求：必須充分驗證用于檢測細菌內(nèi)毒素的替代方法，以確保使用的替代方法等同于或優(yōu)于現(xiàn)有的內(nèi)毒素檢查法，并最終由相應(yīng)的監(jiān)管機構(gòu)批準；

與《美國藥典》一致（對應(yīng)2.方法的選擇及5.其他（替代方法部分））

詞匯表和參考文獻

詞匯表和參考文獻

無

產(chǎn)品內(nèi)毒素檢查法的建立

無

《中國藥典》規(guī)定為了驗證樣品和不同廠家鱟試劑反應(yīng)的一致性：應(yīng)使用兩個生產(chǎn)廠家的鱟試劑對至少3 批樣品進行干擾試驗。并且明確建議了不宜建立細菌內(nèi)毒素檢查項的情況：無法排除供試品對細菌內(nèi)毒素檢查的干擾作用或只能使用最高靈敏度鱟試劑（凝膠法0.03 EU·mL-1，光度法0.001  EU·mL-1）。（對應(yīng)4.產(chǎn)品內(nèi)毒素檢查法的建立）

總結(jié)

《美國藥典》在生產(chǎn)過程中、實驗細節(jié)、質(zhì)量管理給予了較多指導(dǎo)

《中國藥典》在方法的選擇、供試品的前處理方法、產(chǎn)品細菌內(nèi)毒素檢查法建立給予了較多指導(dǎo)